一. 全基因庫篩選/功能基因組學(xué):
1. CRISPR/cas9文庫簡介
???????? 2013年以來,CRISPR/cas9技術(shù)憑借著成本低廉,操作方便,效率高等優(yōu)點,,CRISPR/cas9技術(shù)迅速風(fēng)靡全球得實驗室,成為了生物科研得有力幫手,是繼“鋅指核酸內(nèi)切酶(ZFN)”、“類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶(TALEN)”之后出現(xiàn)得第三代“基因組定點編輯技術(shù)”。
??????? CRISPR/cas9系統(tǒng)最初在大腸桿菌基因組中被發(fā)現(xiàn),是細菌中抵抗外援病毒得免疫系統(tǒng)。CRISPR/cas9系統(tǒng)由兩部分組成,一部分是用來識別靶基因組得,長度為20bp左右得sgRNA序列,另外一部分是存在于CRISPR位點附近得雙鏈DNA核酸酶-Cas9,能在sgRNA得引導(dǎo)下對靶基因進行切割,最終通過細胞內(nèi)得非同源性末端連接機制(NHEJ)和同源重組修復(fù)機制(HDR)對形成斷裂的DNA進行修復(fù),從而形成基因的敲除和插入,最終實現(xiàn)基因的(定向)編輯。
?????? 與前兩代技術(shù)相比,CRISPR-Cas9技術(shù)最大的突破是不僅可以對單個基因進行編輯,更重要的是可以同時對多個基因進行編輯,這也為全基因組篩選提供了有效的方法。
????? 2. CRISPR/cas9文庫種類
???? 1).CRISPR/cas9敲除文庫:
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???? 2).CRISPR/cas9激活文庫:
???? 3).人源lncRNA 激活庫:
???? 4).定制CRISPR/cas9文庫
??? 靶位點確認及sgRNA文庫設(shè)計;
??? sgRNA文庫芯片合成;
??? sgRNA文庫構(gòu)建;
??? QC驗證文庫質(zhì)量
?? 更多資訊關(guān)注輝園苑官方網(wǎng)站:http://www.hyymed.com/