中國醫(yī)科大學(xué)最近發(fā)表了一篇7分的文章，

我們一起來學(xué)習(xí)一下吧~

《LINC00665可以被TAF15S延長半衰期，并通過STAU1介導(dǎo)的mRNA降解阻止了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的癌變》

為了尋找神經(jīng)膠質(zhì)瘤中l(wèi)ncRNA及其有關(guān)的治療靶標(biāo)，作者從臨床樣本和癌細(xì)胞株的RNA表達(dá)譜中篩選到了一批神經(jīng)膠質(zhì)瘤的差異表達(dá)基因，通過數(shù)據(jù)庫篩選和軟件預(yù)測了這些基因之間的結(jié)合位點。RNA-IP、ChIP和雙熒光素酶機(jī)制實驗驗證了互作關(guān)系，RNA和蛋白的表達(dá)也做了基因之間的調(diào)控關(guān)系。最后，通過動物實驗驗證了lncRNA相關(guān)的3個基因組合抑癌效果最優(yōu)，具有成為治療靶標(biāo)的價值。

01、文章亮點

通過引入了一個轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的關(guān)鍵蛋白——STAU1，把lncRNA調(diào)控下游轉(zhuǎn)錄因子的關(guān)系串聯(lián)在一起；lncR665可以被上游的TAF15調(diào)控，同時lncR665調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子MTF1和YY2的降解。

02、涉及的調(diào)控機(jī)制

? TAF15可以延長lncR665的半衰期；

? lncR665可以與促癌基因YY2和MTF1轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合配對；

? lncR665在雙鏈RNA結(jié)合蛋白STAU1的幫助下，lncR665可以使YY2和MTF1的mRNA降解；

? YY2和MTF1是細(xì)胞周期蛋白GSTE1的轉(zhuǎn)錄因子，YY2和MTF1啟動GSTE1的表達(dá)；

調(diào)控機(jī)制圖

03、實驗思路

?發(fā)現(xiàn)抑癌基因TAF15(轉(zhuǎn)錄因子)

? ? ??

圖1A-C正常組織/正常細(xì)胞相比，腫瘤的TAF15表達(dá)水平更低，腫瘤分級越高，TAF15越低。

補充圖1a：TAF15低表達(dá)患者組生存期更短。

? 發(fā)現(xiàn)抑癌基因lncR665

補充圖2：lncRNA表達(dá)譜分析：癌細(xì)胞比正常細(xì)胞的lncR665表達(dá)水平更低，TAF15高表達(dá)細(xì)胞株的lncR665表達(dá)水平也更低。

圖1 D：FISH定位，看正常細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞的lncR665（紅色）更多；

圖1 E：QPCR水平，看正常細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞 lncR665表達(dá)更多；

圖1 F：cck8檢測，腫瘤細(xì)胞過表達(dá)TAF15增殖下降，腫瘤細(xì)胞過表達(dá)lncR665增殖下降， 腫瘤細(xì)胞同時過表達(dá)TAF15和 lncR665，增殖進(jìn)一步下降。

圖1 G：凋亡檢測，圖1 H：細(xì)胞侵襲

腫瘤細(xì)胞過表達(dá)TAF15凋亡增加，侵襲減少，

腫瘤細(xì)胞過表達(dá)lncR665凋亡增加，侵襲減少，?

腫瘤細(xì)胞同時過表達(dá)TAF15和 lncR665，凋亡進(jìn)一步增加，侵襲減少。

? TAF15與lncR665存在相互作用

? ? ? ? ??

圖2 A：QPCR檢測，腫瘤細(xì)胞過表達(dá)TAF15，lncR665增加；?

圖2 B：RNA IP+QPCR檢測，腫瘤細(xì)胞 TAF15可以與lncR665共沉淀；?

圖2 C：RNA pulldown+WB檢測，腫瘤細(xì)胞 lncR665可以pull down TAF15；?

圖2 D：新生RNA捕獲 + QPCR檢測，腫瘤細(xì)胞過表達(dá)TAF15，新生lncR665不變；?

圖2 E：RNA聚合酶抑制劑+QPCR檢測，腫瘤細(xì)胞過表達(dá)TAF15， lncR665 半衰期延長；?

? 發(fā)現(xiàn)MTF1和YY2是促癌基因

? STAU1和lncR665、MTF1(轉(zhuǎn)錄因子)和YY2(轉(zhuǎn)錄因子)存在調(diào)控關(guān)系

圖3A-B：在QPCR和WB水平，lnR665過表達(dá)時，MTF1減少；STAU1過表達(dá)時，MTF1增加；lnR665和STAU1同時過表達(dá)時，MTF1恢復(fù)。

圖3C：RNA IP+QPCR檢測，STAU1可以拉取lncR665或MTF1。

圖3D：雙熒光素酶檢測，lncR665結(jié)合MTF1的3’UTR 。

圖3EQPCR檢測lncR665使MFT1半衰期縮短，STAU1使MFT1半衰期縮短延長；?

圖3G-Icck8、凋亡、侵襲實驗，腫瘤細(xì)胞過表達(dá)MTF1，可以挽救LncR665的抑癌作用。

? 預(yù)測并驗證MTF1和YY2可以啟動細(xì)胞周期蛋白GTSE1的轉(zhuǎn)錄

圖7A：生信預(yù)測+ChIP+PCR驗證MTF1結(jié)合GTSE1的啟動子區(qū)；

圖7B-C：敲除或過表達(dá)MTF1細(xì)胞株，QPCR和WB驗證，MTF1和GTSE1有正相關(guān)趨勢；

? 生信分析臨床數(shù)據(jù)驗證發(fā)現(xiàn)MTF1、YY2和GTSE1高表達(dá)都與預(yù)后不良相關(guān)

? 體內(nèi)驗證TAF15+lncR665+MTF1-或YY2- 3個組合的抑癌效果最優(yōu)

圖8 A-C :TAF15+或lnc665+都是抑癌；MTF1-或YY2-都是抑癌；TAF15+lncR665+MTF1-或YY2-抑癌效果最優(yōu)。

⑨ 體內(nèi)驗證GTSE1-也有明顯抑癌效果

注：為了方便理解，以上按照作者的推測標(biāo)出了抑癌基因和促癌基因）

04、點評

以lncR665為中心，研究者講明了臨床預(yù)后有關(guān)的分子TAF15-lncR665-MTF1/YY2-GTSE1通路。美中不足的是，研究者沒有l(wèi)ncR665差異表達(dá)的臨床預(yù)后分析結(jié)果，而且在其他腫瘤類型中，lncR665是促癌基因，和本研究結(jié)論相反。

最后兩張表格總結(jié)這篇文章的實驗思路和實驗方法

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