????? 對(duì)某個(gè)已知基因序列的特定堿基進(jìn)行定點(diǎn)改變、缺失或者插入。
? ? ? 體外定點(diǎn)突變技術(shù)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的復(fù)雜關(guān)系的有力工具,也是實(shí)驗(yàn)室中改造/優(yōu)化基因常用的手段。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定其功能,二者之間的關(guān)系是蛋白質(zhì)組研究的重點(diǎn)之一。定點(diǎn)突變可以改變對(duì)應(yīng)的氨基酸序列和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),對(duì)突變基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行研究有助于人類(lèi)了解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系,探討蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)/結(jié)構(gòu)域。定點(diǎn)突變技術(shù)的潛在應(yīng)用領(lǐng)域很廣,比如研究蛋白質(zhì)相互作用位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)、改造酶的不同活性或者動(dòng)力學(xué)特性,改造啟動(dòng)子或者DNA作用元件,提高蛋白的抗原性或者是穩(wěn)定性、活性、研究蛋白的晶體結(jié)構(gòu),以及藥物研發(fā)、基因治療等等方面。
定點(diǎn)突變的原理
? ? ? ?定點(diǎn)突變是指通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組,也可以是質(zhì)粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化),包括堿基的添加、刪除、點(diǎn)突變等。定點(diǎn)突變能迅速、高效的提高DNA所表達(dá)的目的蛋白的性狀及表征,是基因研究工作中一種非常有用的手段。
技術(shù)路線:
1.? 引物設(shè)計(jì)。
2.? 表達(dá)載體設(shè)計(jì)。
3.? PCR點(diǎn)突變。
4.? DpnI酶消化。
5.? 轉(zhuǎn)化擴(kuò)增載體。
客戶需提供:
1.? 靶基因/靶蛋白信息。如:已知NCBI編號(hào),基因序列。
2.? 靶基因cDNA/DNA模板。
我們的服務(wù):
1.? 針對(duì)性點(diǎn)突變引物設(shè)計(jì)及合成。
2.? 正常表達(dá)載體。
3.? 突變后表達(dá)載體。
4.? 無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒擴(kuò)增提取。