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流式細胞凋亡
2019.08.15
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1、實驗原理(細胞凋亡檢測的方法很多,我們采用的哪種?Annexin V/PI雙染法嗎)

? ? ?細胞凋亡(Cell apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡,亦稱為程序性細胞死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用,它并不是病理條件下的損傷,而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。

? ? ?Annexin V(或 Annexin A5)為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員,以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細胞漿膜的內(nèi)層,但在凋亡早期,膜不對稱性喪失,PS 易位至細胞表面。熒光標記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合,表明該細胞為凋亡細胞。


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機械損傷(Q1):細胞膜破損嚴重,Annexin V-APC染不上。

晚期凋亡(Q2):細胞膜已經(jīng)受損,7-AAD(ECD-A)與Annexin V-APC染料可以進入細胞內(nèi)與DNA結(jié)合,不可逆轉(zhuǎn)。

早期凋亡(Q3):細胞只有磷脂酰絲氨酸PS外翻,細胞膜完整,對7-AAD(ECD-A)拒染,可逆轉(zhuǎn)

活細胞(Q4):對Annexin V-APC和7-AAD(ECD-A)都拒染


2、技術(shù)應用

? ? ?檢測藥物、基因或蛋白等對細胞凋亡的影響。

3、實驗步驟

? ? ?1.細胞培養(yǎng)及種板;2.收集細胞及計數(shù);3.孵育染料;4.流式細胞儀檢測;5. Flowjo分析結(jié)果

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4、實驗步驟

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客戶提供:細胞株(凍存株或培養(yǎng)細胞)及處理用的藥物,細胞培養(yǎng)基信息,細胞特殊處理方式

HYY提供:原始圖片、流式原始數(shù)據(jù),完整實驗報告




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