????? MicroRNA (miRNA) 是一類由內(nèi)源基因編碼的長度約為22 個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，它們?cè)趧?dòng)植物中參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。到目前為止， 在動(dòng)植物以及病毒中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有28645個(gè)miRNA 分子 。大多數(shù)miRNA 基因以單拷貝、多拷貝或基因簇(cluster) 的形式存在于基因組中 。

? ? ? ?環(huán)狀RNA（circRNA）是一類特殊的非編碼RNA分子（在活體中有時(shí)也有表達(dá)），也是RNA領(lǐng)域最新的研究熱點(diǎn)。早在 20 世紀(jì)八十年代即有研究報(bào)道，但由于它們表達(dá)豐度低，文獻(xiàn)報(bào)道較少，一直被認(rèn)為是 RNA 轉(zhuǎn)錄剪切的罕見錯(cuò)誤而被忽視。circRNA分子呈封閉環(huán)狀結(jié)構(gòu)，不受RNA外切酶影響，表達(dá)更穩(wěn)定，不易降解。在功能上，近年的研究表明，circRNA分子富含microRNA（miRNA）結(jié)合位點(diǎn)，在細(xì)胞中起到miRNA海綿（ miRNA sponge）的作用，進(jìn)而解除miRNA對(duì)其靶基因的抑制作用，升高靶基因的表達(dá)水平；這一作用機(jī)制被稱為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA（ceRNA）機(jī)制。通過與疾病關(guān)聯(lián)的miRNA相互作用， circRNA在疾病中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。

? ? ? ?LncRNA是長度大于 200 個(gè)核苷酸的非編碼 RNA。研究表明, lncRNA 在劑量補(bǔ)償效應(yīng)(Dosage compensationeffect)、表觀遺傳調(diào)控、細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞分化調(diào)控等眾多生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用，成為遺傳學(xué)研究熱點(diǎn)

? ? ? ?表達(dá)載體（Expression vectors）就是在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達(dá)元件（如啟動(dòng)子、RBS、終止子等），使目的基因能夠表達(dá)的載體。表達(dá)載體分為慢病毒載體與非慢病毒載體。以下主要介紹慢病毒載體：

原理：

? ? ? ?將外源基因片段插入到慢病毒載體的多克隆位點(diǎn)。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而達(dá)到良好的的基因治療效果。對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞， 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等，使用慢病毒載體，能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)染效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達(dá)。

技術(shù)路線：

1. 目的基因調(diào)取。

2. 慢病毒載體插入目的基因。

3. 轉(zhuǎn)化培養(yǎng)。

4. 克隆篩選及鑒定。

5. 無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取。

客戶需提供：

1. miRNA、LncRNA、circRNA信息。如：已知NCBI編號(hào)，基因序列。

2. cicrRNA需提供環(huán)化位點(diǎn)信息。

我們的服務(wù)：

1. 基因合成。

2. 載體設(shè)計(jì)。

3. 過表達(dá)構(gòu)建及鑒定報(bào)告。

4. 出貨質(zhì)粒，甘油菌。

5. 載體更換。

6. cDNA文庫制備。

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LncRNA及miRNA慢病毒過表達(dá)圖譜? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??CircRNA慢病毒過表達(dá)圖譜