miRNA/LncRNA/circRNA抑制載體構建
?????? RNA干擾(RNAi)是一種RNA介導的基因沉默機制。在哺乳動物細胞中,可通過轉入能與目的基因配對的雙鏈RNA來實現(xiàn),如siRNA、短發(fā)夾RNA(shRNA)。目前,主流的方法是將shRNA構建于載體中,利用細胞內(nèi)的Dicer酶生成相應的siRNA,發(fā)揮RNAi的作用。一方面,shRNA慢病毒載體比體外合成的siRNA更為穩(wěn)定,另一方面,經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態(tài)的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩(wěn)定表達。
原理:
? ? ? ?我們的RNAi抑制載體構建基于慢病毒表達系統(tǒng),一般采用U6啟動子驅動的pLKOG載體。
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技術路線:
1.shRNA靶點設計。
2.慢病毒載體插入靶點基因。
3.轉化培養(yǎng)。
4.克隆篩選及鑒定。
5.無內(nèi)毒素質粒提取。? ??
客戶需提供:
1.miRNA、LncRNA、circRNA信息。如:已知NCBI編號,基因序列。
我們的服務:
1.靶點基因片段合成。
2.載體設計。
3.抑制構建及鑒定報告。
4.出貨質粒,甘油菌。
5.載體更換。
pLKOG抑制載體圖譜