一、操作步驟
1.檢測(cè)前準(zhǔn)備工作
試劑耗材：細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM或1640、FBS、0.25%胰蛋白酶 (自配，無(wú)菌)、PBS (自配，無(wú)菌)、電轉(zhuǎn)緩沖液。
測(cè)試細(xì)胞：根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組提前準(zhǔn)備好電轉(zhuǎn)需要用到的細(xì)胞，每個(gè)電轉(zhuǎn)杯需要1*105-1*106個(gè)細(xì)胞。
其他準(zhǔn)備：用具準(zhǔn)備電轉(zhuǎn)儀器、電轉(zhuǎn)杯（1mm）、電轉(zhuǎn)液、毛細(xì)管槍頭、6孔板、倒置熒光顯微鏡、移液器。

二、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)流程
1. 細(xì)胞消化，用PBS處理成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，離心（1000rpm，5min）棄PBS。
2.用850ul CellEasy電轉(zhuǎn)液重懸107cells，每個(gè)電轉(zhuǎn)杯加入的細(xì)胞懸液約85uL，細(xì)胞量為：1*106/電轉(zhuǎn)杯。
3.細(xì)胞懸液中加入質(zhì)粒8.5ug(終濃度10ug/mL），混勻。
4.毛細(xì)管槍頭移取85ul到電轉(zhuǎn)杯，從底部加入，保證沒(méi)有氣泡，氣泡會(huì)影響電轉(zhuǎn)效果。
5.調(diào)好儀器參數(shù)，逐個(gè)電轉(zhuǎn)，電轉(zhuǎn)結(jié)束后迅速加入少量培養(yǎng)基。
6.六孔板中提前加入2ml完全培養(yǎng)基，電轉(zhuǎn)細(xì)胞懸液吸出加入到孔板，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24-48h，觀察熒光蛋白表達(dá)，計(jì)算電轉(zhuǎn)效率；電轉(zhuǎn)后第2天觀察細(xì)胞存活率。
7.依次操作完上述所有樣品。
8.收拾臺(tái)面，電轉(zhuǎn)杯及時(shí)清洗，儀器歸位。

細(xì)胞電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn).pdf