電轉(zhuǎn)操作視頻

? ? ? ?自2019年9月9日HYY自主研發(fā)CellEasy^TM低電壓基因電轉(zhuǎn)儀上市以來，得到了廣大老師同學(xué)的熱烈反饋，紛紛打來電話咨詢電轉(zhuǎn)儀相關(guān)事項(xiàng)。講座預(yù)約不斷，今天HYY的科研小伙伴用心為大家?guī)砹岁P(guān)于細(xì)胞電轉(zhuǎn)的操作視頻及細(xì)胞電轉(zhuǎn)詳細(xì)步驟。電轉(zhuǎn)儀我們一起用起來吧！

一、操作步驟

檢測前準(zhǔn)備工作

試劑耗材：

細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM或1640、FBS、0.25%胰蛋白酶 (自配，無菌)、PBS (自配，無菌)、電轉(zhuǎn)緩沖液。

測試細(xì)胞：根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組提前準(zhǔn)備好電轉(zhuǎn)需要用到的細(xì)胞，每個(gè)電轉(zhuǎn)杯需要1×10⁶個(gè)細(xì)胞。

其他準(zhǔn)備：用具準(zhǔn)備電轉(zhuǎn)儀器、電轉(zhuǎn)杯（1mm）、電轉(zhuǎn)液、毛細(xì)管槍頭、6孔板、倒置熒光顯微鏡、移液器。

二、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)流程

1、細(xì)胞消化，用PBS處理成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，離心（1000rpm，5min）棄PBS；

2、850ul電轉(zhuǎn)液重懸107cells，每個(gè)電轉(zhuǎn)杯加入的細(xì)胞懸液約85uL；

3、細(xì)胞懸液中加入質(zhì)粒8.5ug(終濃度10ug/mL），混勻；

4、毛細(xì)管槍頭移取85ul到電轉(zhuǎn)杯，從底部加入，保證沒有氣泡，氣泡會(huì)影響電轉(zhuǎn)效果；

5、調(diào)好儀器參數(shù)，逐個(gè)電轉(zhuǎn)，電轉(zhuǎn)結(jié)束后迅速加入少量培養(yǎng)基；

6、六孔板中提前加入2ml完全培養(yǎng)基，電轉(zhuǎn)細(xì)胞懸液吸出加入到孔板，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24-48h，觀察熒光蛋白表達(dá)，計(jì)算電轉(zhuǎn)效率；電轉(zhuǎn)后第2天觀察細(xì)胞存活率；

7、依次操作完上述所有樣品；

8、收拾臺(tái)面，電轉(zhuǎn)杯及時(shí)清洗，儀器歸位。

三、說明書