卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，手術(shù)治療及聯(lián)合化療為主要治療手段，但晚期卵巢癌的死亡率仍然較高。因此，了解其潛在的致病機(jī)制對(duì)于開(kāi)發(fā)新的治療策略和改善患者的總體預(yù)后至關(guān)重要。FBW7屬于F-box蛋白家族，是Skp1-Cullin-F-box (SCF)泛素連接酶復(fù)合體的底物識(shí)別成分，介導(dǎo)不同癌基因蛋白的降解。然而，F(xiàn)BW7在卵巢癌中的進(jìn)展仍然是未知的。

一、研究?jī)?nèi)容

1、FBW7下調(diào)與較差的預(yù)后及低水平的m6A修飾相關(guān)

卵巢癌組織中，F(xiàn)BW7蛋白和mRNA水平顯著下調(diào)，F(xiàn)BW7低表達(dá)與較好的預(yù)后相關(guān)；FBW7是一個(gè)抑癌基因，主要調(diào)控癌蛋白的泛素化和降解。研究報(bào)道，m6A修飾在生理和病理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，隨后研究者選取60例卵巢癌樣本檢測(cè)m6A水平。結(jié)果表明，F(xiàn)BW7高表達(dá)組，m6A水平上調(diào)；并且較好的總生存率與較高的m6A水平顯著相關(guān)。

2、腫瘤抑制基因FBW7抑制卵巢癌細(xì)胞增殖

體內(nèi)、體外功能實(shí)驗(yàn)表明，過(guò)表達(dá)FBW7抑制卵巢癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)凋亡；干擾FBW7表達(dá)，則顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖、克隆形成。

3、FBW7誘導(dǎo)YTHDF2泛素化和蛋白酶體降解

為了進(jìn)一步挖掘FBW7介導(dǎo)的m6A修飾調(diào)控機(jī)制，通過(guò)COIP-MS鑒定FBW7互作蛋白，分析發(fā)現(xiàn)YTHDF2與FBW7相互作用；COIP，免疫熒光染色分析發(fā)現(xiàn)，YTHDF2與FBW7相互作用可能發(fā)生在細(xì)胞質(zhì)。

FBW7是SCF E3泛素連接酶的一個(gè)組成部分，為了確定FBW7是否通過(guò)相互作用調(diào)節(jié)YTHDF2蛋白穩(wěn)定性。研究者將FBW7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)到卵巢癌細(xì)胞，YTHDF2蛋白顯著下調(diào)；然而，MG132蛋白酶抑制劑處理后YTHDF2蛋白下調(diào)被逆轉(zhuǎn)。另外，放線菌酮處理FBW7過(guò)表達(dá)細(xì)胞，縮短了YTHDF2蛋白半衰期；FBW7促進(jìn)YTHDF2泛素化介導(dǎo)蛋白降解，調(diào)控m6A修飾系統(tǒng)。

4、YTHDF2與FBW7表達(dá)及卵巢癌預(yù)后呈負(fù)相關(guān)

YTHDF2作為腫瘤抑制因子FBW7降解的底物，作者進(jìn)一步研究了兩者的相關(guān)性。研究表明，卵巢癌組織中YTHDF2的mRNA和蛋白水平顯著上調(diào)，與FBW7表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，且YTHDF2高表達(dá)與較差的預(yù)后相關(guān)。

5、癌基因蛋白YTHDF2促進(jìn)卵巢癌的發(fā)展

體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)表明，抑制YTHDF2可以顯著抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、克隆形成、腫瘤生長(zhǎng)，促進(jìn)凋亡；YTHDF2過(guò)表達(dá)顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖、集落形成，貼壁不依賴性生長(zhǎng)；敲除YTHDF2顯著減弱FBW7缺失誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖和集落形成能力。因此，YTHDF2可能導(dǎo)致卵巢癌的發(fā)生；FBW7通過(guò)誘導(dǎo)蛋白降解抑制卵巢癌的發(fā)生，從而降低YTHDF2致癌活性。

6、BMF作為FBW7-YTHDF2級(jí)聯(lián)效應(yīng)因子

研究表明，YTHDF2促進(jìn)m6A修飾轉(zhuǎn)錄本降解，作者檢測(cè)了是否FBW7通過(guò)抑制YTHDF2調(diào)控細(xì)胞m6A修飾。通過(guò)LC-MS/MS分析發(fā)現(xiàn)，抑制YTHDF2顯著上調(diào)m6A水平；過(guò)表達(dá)FBW7上調(diào)m6A水平，F(xiàn)BW7表達(dá)與m6A呈正相關(guān)；FBW7介導(dǎo)的m6A豐度調(diào)節(jié)依賴于YTHDF2。

RNA-seq分析表明，抑制YTHDF2細(xì)胞中，348個(gè)基因上調(diào)，320個(gè)基因下調(diào)；meRIP-seq分析YTHDF2抑制細(xì)胞及對(duì)照，m6A peak主要位于CDS區(qū)，m6A motif序列為GGAC[U/A]，表明在卵巢癌中YTHDF2可能與m6A結(jié)合。通過(guò)整合分析RNA-seq和m6A-seq結(jié)果，YTHDF2抑制細(xì)胞中，25個(gè)基因有39 peak被上調(diào)，其中BMF的peak顯著富集；

進(jìn)一步證實(shí)，YTHDF2敲除顯著上調(diào)BMF mRNA表達(dá)水并延長(zhǎng)其半衰期，說(shuō)明BMF mRNA可能是YTHDF2降解的靶點(diǎn)。m6A修飾在YTHDF2誘導(dǎo)的mRNA降解中扮演重要作用，是否抑制m6A修飾能夠穩(wěn)定BMF mRNA？甲基化抑制劑DAA處理卵巢癌細(xì)胞，BMF mRNA水平顯著上調(diào)，表明甲基化對(duì)BMF mRNA的降解至關(guān)重要。

RIP證明了YTHDF2與BMF的互作。YTHDF2過(guò)表達(dá)降低了BMF的表達(dá)。YTHDF2對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響可以通過(guò)恢復(fù)BMF表達(dá)逆轉(zhuǎn)。此外，F(xiàn)BW7過(guò)表達(dá)與YTHDF2下調(diào)一樣，顯著誘導(dǎo)BMF mRNA表達(dá)，這是由于FBW7降解YTHDF2。此外，F(xiàn)BW7的過(guò)表達(dá)或敲除YTHDF2增加了BMF pre-mRNA? m6A修飾的水平。FBW7介導(dǎo)的BMF調(diào)控依賴于YTHDF2。作者也揭示了在卵巢癌組織中BMF的表達(dá)與YTHDF2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而與FBW7表達(dá)呈正相關(guān)。上述結(jié)果表明，在卵巢癌中,FBW7與YTHDF2相互作用并通過(guò)泛素化降解該蛋白，從而促進(jìn)BMF表達(dá)。。

二、小結(jié)

FBW7通過(guò)拮抗YTHDF2介導(dǎo)的BMF mRNA降解，從而抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。該研究表明YTHDF2是潛在的癌癥治療靶標(biāo)，為靶向治療癌癥提供了新的思路。